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背景：顱腦外傷（TBI）是世界范圍內威脅生命的疾病。大多數中國人由于運動受傷，辦公室或家中意外摔倒以及摩托車受傷而患有TBI。由于社會對疾病的了解不多，因此TBI被稱為“沉默流行病"。 TBI后繼發性腦損傷引起病理，生理和生物學反應，導致腦功能障礙。生物和化學過程通常觸發連鎖反應，可導致炎癥細胞，能量缺乏，興奮性毒性，細胞凋亡和氧化應激。氧化應激在上述過程中起重要作用。氧化會增強炎癥和其他反應，因此促進炎癥和其他反應會加劇氧化應激并形成惡性循環。氧化應激在TBI后一小時發生，并立即成為病理反應。因此，抗氧化劑策略是治療急性TBI的關鍵。由于神經膜的簡單過氧化作用，大腦容易受到氧化損傷。它們富含脂肪酸，容易被氧化，大腦組織需要大量的氧氣。它占總耗氧量的20％。大腦富含脂質，使其更容易受到自由基的破壞。活性氧（ROS），例如超氧陰離子，羥基自由基和過氧化氫（H2O2），被認為是參與細胞生長和分化信號傳遞的第二信使。如果ROS的產生和去除不平衡，則會釋放生物系統中的氧化應激。過量的ROS產生是在TBI發展中引起氧化應激的重要因素。細胞在有氧環境中產生過氧化氫，超氧陰離子，羥基自由基和其他活性氧。這些自由基可以與生物分子相互作用，例如DNA，碳水化合物，蛋白質，脂質，并破壞各種細胞成分。大腦富含抗氧化酶，例如過氧化氫酶（CAT），超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH），可防止氧化損傷。同時，丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSSG）在腦組織中引起氧化應激。在氧化條件下，兩個GSH分子提供電子并將其轉換為GSSG。 GSH/GSSG摩爾比是很強的氧化應激和疾病風險指數。不幸的是，TBI的治療效果遠不能令人滿意，因為其病因是由高度復雜和相互作用的機制觸發的。西藥的抗氧化策略失敗了。科學家已經開始從中草藥中尋找具有潛在創新性的植物成分，以進行抗氧化劑治療。近年來，大黃有效地預防了由嚴重腦損傷引起的腦功能障礙。大黃具有抑制大鼠腦組織脂質過氧化的作用。大黃可以顯著減少DNA段化，這在乳酸脫氫酶釋放和細胞凋亡中起關鍵作用。近年來，大黃已被用于治療腦部創傷并取得了令人滿意的結果。大黃作為大黃中重要的活性成分，具有豐富的有效氧化特性。但是，TBI治療的機制仍不清楚。因此，本研究旨在確定大黃酸的抗氧化作用，并進一步確定大黃酸是否可以用作大黃的靶向治療材料來治療TBI。
方法：動物和外科手術：在標準溫度22±2℃，12-12明暗循環，相對濕度50±10％的標準條件下飼養200-300g雄性SD大鼠。試驗前12小時不給大鼠喂食，但給它們充足的水。將108只SD大鼠隨機分為6組，每組分別在3個時間點（8、16和24小時）進行功效測試：（1）對照組：TBI后對大鼠進行灌胃通過氯化鈉（n = 6）給予等量的生理鹽水（0.9％）；（2）假手術組：大鼠進行了相同的手術，只是大腦皮層完整（ ＝ 6）；（3）12g/kg大黃治療組：同一創傷大鼠口服大黃（n ＝ 6）；（4）6g/kg大黃組：同一創傷大鼠后口服大黃。 （N ＝ 6）；（5）3g/kg大黃組：在相同的外傷大黃組之后對大鼠口服大黃（n ＝ 6）；（6）12mg/kg的雨水組：在對大鼠相同的外傷后口服（n = 6）。皮層電刺激（CCI）用于建立大鼠顱腦損傷模型。用麻醉雄性SD大鼠，并用3D火焰氣錘操作。此后，在顱骨右側的中央空間側進行手術，用手上的環戊烷打開前reg和λ之間的中心，僅損傷實驗大鼠的腦表面的一側。損壞指數的碰撞深度為5毫米，持續500毫秒，每秒6米。我們還對對照大鼠進行了開顱手術，但并未損害大鼠大腦。然后縫合傷口，將大鼠蘇醒并放置在加熱墊上30-60分鐘以維持正常的體溫。每天觀察受傷的小鼠至少4個小時。
UPLC-MS/MS檢測CCI大鼠腦組織中的大黃酸：向CCI大鼠口服大黃以測量腦組織中吸收的化合物，并通過UPLC-MS/MS測定離子峰和保留時間我測量了將大黃（3 g/kg，6 g/kg，12 g/kg）和大黃酸（12 mg/kg）灌胃給予CCI大鼠。胃內給藥后，在第8、16和24小時處死每組大鼠。將大鼠麻醉并以400 mg/kg的劑量腹膜內注射10％水合氯醛。 30分鐘后，處死動物，收集腦樣本，用足夠的冰冷的DD水洗滌腦組織樣本，然后加入4 ml冰甲醇進行勻漿。在4°C下以3000pm離心勻漿10分鐘。離心后，將混合物蒸發至干，并在37℃下用氮氣回收上清液。提取液用200μL20％甲醇溶解，溶液在4°C下以15000pm離心15分鐘。離心后，用0.22μm尼龍過濾器過濾上層。將5μL注入UPLC-MS/MS系統并進行分析。
估計氧化和抗氧化狀態：用考馬斯亮藍法測量超氧化物歧化酶活性：使用試劑盒測量總SOD活性。在450nm的波長下測量液體的吸光度。活性通過蛋白質的量校正，并表示為控制時間。讀取450m處的吸光度，并使用以下公式計算SOD活性：[（對照值的空白值）-（樣品的空白值）] /（對照值的空白值）x 2 x（總體積/體積）/蛋白質濃度。使用mg/mg蛋白表達SOD活性。
過氧化氫酶活性的測量：根據測試試劑盒的說明書測量CAT的活性。在450m波長下測量測試溶液的吸光度。使用摩爾Mmol過氧化氫消耗/分鐘/ mg來表達酶活性。
MDA含量測定：使用試劑盒測定MDA。要確定MDA含量，請使用（TBA）方法。谷胱甘肽活性和氧化型谷胱甘肽水平的測量：活性谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽均根據GSH/GSSG檢測試劑盒進行操作。 10分鐘后，在分光光度計上記錄405m的吸光度并計算GSH/GSSG比。總GSH含量表示為μmol/ mg蛋白質。結果：抗氧化測試作用Rhubarb和Lein顯著增加了CCI大鼠腦組織中的SOD水平：與假手術組相比，CCI大鼠的SOD活性明顯降低。與對照組相比，在不同時間點（16小時和24小時），大黃（12 g/kg）和大黃酸（12 mg/kg）顯著增加了SOD水平。與對照組相比，在大黃（6 g/kg）的不同時間點（16 h和24 h），SOD水平顯著增加。與車輛組相比，雨水（12 mg/kg）在8小時內增加了SOD含量。大黃（3g/kg和6g/kg）在8小時時與載劑組相比沒有統計學意義。hubarb和Rein顯著增加CCI大鼠腦組織中的CAT水平：與假手術組相比，CCI大鼠中CAT活性顯著降低。結果表明，大劑量大黃（12g/kg）和16h大黃酸（12mg/kg）分別在8h和16h后顯著增加了CAT活性。與媒介物組相比，該線（12 mg/kg）在不同時間點（8小時和24小時）增加了CAT水平。在不同時間點（8、16、24小時），大黃（3 g/kg）與對照組相比沒有統計學意義。大黃和大黃酸可以顯著降低CCI大鼠腦組織的MDA含量：與假手術組相比，CCI大鼠的腦MDA含量顯著增加。高劑量大黃（12g/kg）和大黃酸（12mg/kg）16和24小時后，MDA活性顯著降低。與治療組相比，大黃（6g/kg）和大黃酸（12mg/kg）可以在16小時和24小時時顯著降低MDA含量（12mg/kg）。大黃（3g/kg，6g/kg）在8小時內與賦形劑組相比沒有統計學意義。最大的變化發生在24小時內。hubarb和Rein顯著增加CCI大鼠腦組織中的GSH含量和GSH/GSSG比。腦損傷可降低CCI大鼠的GSH含量和GSH/GSSG比，并增加GSSG。結論：線是大黃灌胃后CCI大鼠大腦中的活性成分。該產品線與大黃在創傷性腦損傷治療中的抗氧化能力相似（通過增加SOD，CAT活性，GSH水平和GSH/GSSG比，以及降低MDA和GSSG）。
結果表明，大黃和大黃酸可以作為神經保護劑治療TBI。
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