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以下是肝組織HE服務相關的注意事項

更新時間:2025-07-29      點擊次數:7
  肝組織HE服務是病理學診斷中常用的一項關鍵技術,通過蘇木精-伊紅(HE)染色法對肝組織切片進行染色,以清晰顯示細胞和組織的形態結構,輔助醫生進行疾病診斷和研究。
  該服務基于HE染色的經典原理:蘇木精作為堿性染料,使細胞核中的染色質與胞質內的核糖體呈現紫藍色;伊紅作為酸性染料,使細胞質和細胞間質中的成分呈現紅色或粉紅色。通過這兩種染料的結合,肝組織中的細胞形態、結構及病理變化得以清晰呈現。
  肝組織HE服務是病理檢測中常用的技術,用于觀察肝組織的形態結構、細胞排列及病理改變(如炎癥、壞死、纖維化等)。其操作需嚴格遵循規范,以確保切片質量和診斷準確性。以下是相關注意事項:
  一、標本采集與固定階段
  標本采集
  肝組織取材需迅速,避免因缺血、自溶導致細胞結構破壞(尤其是動物實驗或手術標本,應在離體后30分鐘內固定)。
  取材大小適中:通常為1cm×1cm×0.3cm(厚度不超過0.5cm),確保固定液能充分滲透組織,避免中心部位固定不良。
  若為肝穿刺標本,需標記穿刺方向,避免切片時遺漏關鍵區域;若組織易碎(如肝硬化標本),需輕柔操作,防止機械損傷。
  固定處理
  固定液選擇:使用10%中性福爾馬林(甲醛濃度3.7%~4%,pH 7.0~7.4),固定液體積應為組織體積的5~10倍,避免因液體不足導致固定不充分。
  固定時間:常規肝組織固定6~24小時(小型標本6~12小時,較大標本12~24小時),過長可能導致組織過硬,影響切片;過短則細胞結構不清。
  特殊情況:若需保留糖原等成分,可使用冷固定液(4℃);若組織含較多血液,可先用生理鹽水沖洗后再固定。
  二、組織處理(脫水、透明、包埋)
  脫水
  梯度乙醇脫水:依次經70%、80%、95%(Ⅰ、Ⅱ)、100%(Ⅰ、Ⅱ)乙醇處理,每步時間根據組織大小調整(通常30~60分鐘),確保徹d脫去水分。
  避免跳過低濃度乙醇直接用高濃度,否則可能導致組織收縮、細胞變形(尤其肝血竇豐富,易受影響)。
  透明與浸蠟
  透明劑(如二甲苯)需新鮮,避免雜質污染,透明時間適中(通常15~30分鐘),過長會使組織變脆,過短則蠟無法充分浸潤。
  浸蠟需在恒溫箱中進行(60℃左右),使用熔點56~58℃的石蠟,分2~3次浸蠟(每次30~60分鐘),確保蠟完q取代透明劑,避免切片時出現空洞。
  包埋
  包埋時肝組織需放平,切面朝下,確保后續切片能完整顯示肝小葉結構(中央靜脈、匯管區等關鍵區域)。
  包埋蠟塊需冷卻充分,避免蠟塊內有氣泡,否則切片易碎裂。
  三、切片與貼片
  切片
  切片厚度控制在3~5μm(肝組織較柔軟,過厚易重疊,過薄易破碎),使用鋒利的切片刀或一次性刀片,避免刀痕。
  切片時保持蠟塊溫度穩定(可使用恒溫切片機),防止組織皺縮或斷裂,尤其肝硬化組織因纖維化較硬,需調整切片角度和速度。
  貼片與烤片
  貼片前需清潔載玻片(避免油污影響黏附),可使用多聚賴氨酸或APES處理載玻片,防止脫片。
  切片在45~50℃溫水浴中展平(水溫過高可能導致細胞脫落),輕輕撈取后瀝干水分,置于60~65℃烤箱中烤片2~4小時(或37℃過夜),徹d烘干水分,避免染色時脫片。
  四、染色過程
  脫蠟與水化
  二甲苯脫蠟需徹d(2次,每次5~10分鐘),后續經梯度乙醇(100%、95%、80%、70%)水化至蒸餾水,每步1~3分鐘,避免脫蠟不凈導致染色不均。
  蘇木精染色
  蘇木精染液需新鮮(或過濾后使用),染色時間根據染液濃度和組織類型調整(通常5~10分鐘),肝細胞核應染成深藍色,避免過染(導致核結構模糊)或欠染(核不清)。
  分化步驟關鍵:用1%鹽酸乙醇分化數秒至數十秒,直至組織變為淡粉色,立即用流水沖洗返藍(10~15分鐘),確保核質對比清晰。
  伊紅染色
  伊紅染液染色時間通常1~3分鐘,使肝細胞質、結締組織等染成粉紅色,染色后經梯度乙醇脫水(70%、80%、95%、100%),避免水分殘留導致褪色。
  透明與封片
  二甲苯透明需充分(2次,每次5分鐘),確保切片透明無霧狀。
  封片時使用中性樹膠,避免產生氣泡,蓋玻片需緩慢放下,防止擠壓組織,封片后平放晾干(或37℃烘干),避免樹膠流淌。
  五、質控與存儲
  質量控制
  染色后需鏡檢:肝小葉結構完整,肝細胞、膽管、血管等形態清晰,核質對比分明(核藍、質紅),無皺縮、脫片、染色不均等問題。
  若出現異常(如脫片、染色過淺),需追溯原因(如烤片不充分、染液失效)并重新處理。
  標本與切片存儲
  剩余肝組織標本需在固定液中冷藏(4℃)保存,標記清晰(編號、取材日期、患者信息等)。
  染色后的切片需避光、干燥存儲,避免陽光直射導致褪色,長期保存可使用密封盒防潮。
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