實(shí)時(shí)熒光定量pcr實(shí)驗(yàn)服務(wù)

簡(jiǎn)要描述：實(shí)時(shí)熒光定量pcr實(shí)驗(yàn)服務(wù)是達(dá)為科生物的基礎(chǔ)服務(wù)項(xiàng)目之一，由分子平臺(tái)經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)人員操作完成。

更新時(shí)間：2022-12-23
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實(shí)驗(yàn)

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詳細(xì)介紹

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase Chain Reaction,PCR)自誕生之日起就決定了它不僅是一種高敏感、高特異的檢測(cè)核酸分子的定性方法，而且也是一個(gè)能對(duì)核酸分子進(jìn)行定量的有力工具。1996年，美國(guó)Applied Biosystems公司推出了一種新定量試驗(yàn)技術(shù)間實(shí)時(shí)熒光定量PCR它是通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤；實(shí)時(shí)在線(xiàn)監(jiān)控反應(yīng)過(guò)程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析，計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)內(nèi)容：
PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針為一寡核苷酸，兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；剛開(kāi)始時(shí)，探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5'端一3'端外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR樣品準(zhǔn)備條件:
細(xì)胞樣品：收集細(xì)胞后放入液氮中速凍保存或速東24h后轉(zhuǎn)入-80°C冰箱保存；收集細(xì)胞后，視細(xì)胞量，直接加入1-1.5mL Trizol溶解裂解細(xì)胞，再轉(zhuǎn)入-80°C冰箱保存。
組織樣品：動(dòng)物組織一般取材后立即放入液氮中速凍保存，液氮凍存24h后可轉(zhuǎn)入-80°C冰箱保存；組織樣品同樣可以采用Trizol溶解裂解后放入-80°C冰箱保存。特殊組織(植物等)建議采用新鮮組織即刻提取RNA,逆轉(zhuǎn)合成cDNA后-20°C保存?zhèn)溆谩Ｋ袠悠返奶幚砗捅４孢^(guò)程中，切總反復(fù)凍融。

樣品運(yùn)輸條件：樣品運(yùn)輸條件根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣品的處理?xiàng)l件，可以選擇液氮或者干冰運(yùn)輸。

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