18017847121
當前位置：首頁 > 產(chǎn)品中心 > 實驗技術(shù)服務(wù) > 蛋白組學技術(shù)服務(wù) > 蛋白組學技術(shù)服務(wù)之免疫沉淀實驗
簡要描述：蛋白組學技術(shù)服務(wù)之免疫沉淀實驗：免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。
更新時間：2024-09-12瀏覽次數(shù)：1620詳細介紹
蛋白組學技術(shù)服務(wù)之免疫沉淀實驗免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）是一種基于抗原和抗體特異性相互作用的實驗技術(shù)，用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用以及蛋白質(zhì)與其他生物分子之間的關(guān)系。
這一技術(shù)通過特異性抗體捕獲目標蛋白，并通過與Protein A/G瓊脂糖珠的結(jié)合，使目標蛋白及其復合物從細胞裂解液中沉淀出來，從而實現(xiàn)對感興趣蛋白的研究。
下面將詳細闡述免疫沉淀實驗的流程、應用及注意事項：
1. 免疫沉淀基本流程
細胞裂解：首先收集細胞并加入適量的細胞裂解緩沖液（含蛋白酶抑制劑），在冰上或4℃條件下裂解30分鐘，然后以12,000g離心30分鐘取上清。
抗體孵育：取少量裂解液備用（作為Input樣品），在剩余裂解液中加入特定抗體和Protein A/G瓊脂糖珠，然后在4℃條件下緩慢搖晃孵育過夜。
清洗洗脫：通過離心收集免疫沉淀物，并用裂解緩沖液洗滌數(shù)次以去除非特異性結(jié)合蛋白，最后加入SDS上樣緩沖液，沸水煮后進行SDS-PAGE電泳和Western Blot
分析。
2. 免疫沉淀應用領(lǐng)域
蛋白質(zhì)相互作用分析：通過免疫沉淀捕獲目標蛋白，再用Western Blot檢測是否存在與之相互作用的其他蛋白。
鑒定未知蛋白：利用質(zhì)譜技術(shù)對免疫沉淀后的樣品進行分析，可以發(fā)現(xiàn)新的與目標蛋白相互作用的未知蛋白。
研究蛋白修飾：免疫沉淀可以用于富集具有特定修飾（如磷酸化）的蛋白亞型，進而研究其功能和調(diào)控機制。
3. 免疫沉淀優(yōu)缺點
優(yōu)點：能夠反映生理條件下的蛋白質(zhì)間相互作用，適用于多種蛋白復合物的分離和分析；可以與各種檢測方法如質(zhì)譜、Western Blot聯(lián)用，提高研究的深度和廣度。
缺點：可能無法捕捉到低親和力和瞬時的蛋白互作；非特異性吸附可能導致假陽性結(jié)果，必須通過嚴格的實驗設(shè)計和對照來排除。
4. 免疫沉淀注意事項
優(yōu)化裂解條件：選擇合適的裂解液成分（如離子強度、去垢劑種類和濃度）對于保持蛋白復合結(jié)構(gòu)的完整性至關(guān)重要。
抗體選擇：確?？贵w的高特異性和適用性，使用合適的IgG作為陰性對照。
洗滌步驟：通過多次洗滌瓊脂糖珠，盡量去除非特異性吸附的蛋白。
綜上所述，蛋白組學技術(shù)服務(wù)之免疫沉淀實驗是一項強大的實驗技術(shù)，通過特異性抗體捕獲和沉淀目標蛋白及其復合物，研究者能夠深入探討蛋白質(zhì)間的相互
作用及其在細胞內(nèi)的功能。通過嚴謹?shù)膶嶒炘O(shè)計和操作，可以盡可能地減少假陽性結(jié)果，確保實驗數(shù)據(jù)的可靠性。免疫沉淀不僅有助于闡明蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，還
能為疾病機理和新藥靶點的發(fā)現(xiàn)提供重要線索。
產(chǎn)品咨詢
聯(lián)系人：張
地址：上海市長江南路180號長江軟件園B區(qū)B637室
郵箱：2844970554@qq.com
傳真：歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號了解更多信息
掃一掃
歡迎來到