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4-23
吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結果與瑞特染色法基本相同。但本法對細胞核和寄生蟲著色較好，結構顯示更清晰，而胞質和中性顆粒則著色較差。基本方案實驗材料原位雜交玻片試劑、試劑盒吉姆薩染色液磷酸鈉緩沖液乙醇二甲苯儀器、耗材染色盤培養箱濾紙實驗步驟1.將顯影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盤中。（1）1個盤：pH6.810mmol/l磷酸鈉緩沖液，所配的25倍稀釋的吉姆薩染液。（2）3個盤：水。（3）脫水系列溶液：①3個盤：分別盛50%、70%和95%乙醇。②2個盤：盛有...
4-23
蛋白提取組織樣本總蛋白提取（小鼠肝組織）1、頸椎脫臼處死小鼠，75%乙醇擦拭皮膚，剪開腹腔，剪切肝臟組織。2、平皿中放入6ml預冷0.9%NaCL。3、稱取0.6g左右肝組織，在平皿中剪碎組織，并轉移到勻漿器。4、預冷裂解液中添加PMSF（20ug/2ml）。5、取2ml預冷裂解緩沖液，迅速加入勻漿器，冰浴條件下充分研磨。6、組織研磨液轉移至1.5ml離心管。7、4℃，15000rpm，離心10min。8、取上清組織蛋白粗提取液至新的1.5ml離心管。9、進行蛋白定量，-80...
4-23
1.對于貼壁細胞或細胞涂片PBS洗滌一次。2.如果細胞貼得不牢，可以干燥樣品使細胞貼得更牢。3.用4%多聚甲醛固定細胞15分鐘，用PBS洗滌一次。4.將切片移入濕盒中加入新鮮配制的3%雙氧水,以去除內源性過氧化物酶封閉液，室溫孵育10分鐘，PBS充分淋洗；5.滴加正常山羊血清封閉液，室溫30分鐘，甩去多余液體；6.滴加一抗工作液，37℃孵育2h（或4℃過夜），然后PBS充分淋洗；7.滴加兔/鼠二抗工作液，室溫孵育1h，PBS充分淋洗；8.DAB顯色5-10分鐘，在顯微鏡下掌握...
4-23
一般使用辣根過氧化物酶HRP-ECL發光法或堿性磷酸酶AP-NBT/BICP顯色法。1．HRP-ECL發光法：將A、B發光液按比例稀釋混合。膜用去離子水稍加漂洗，濾紙貼角吸干，反貼法覆于A、B混合液滴上，熄燈至可見淡綠色熒光條帶（5min左右）后濾紙貼角吸干，置于保鮮膜內固定于片盒中，迅速蓋上膠片，關閉膠盒，根據所見熒光強度曝光。取出膠片立即*浸入顯影液中1～2min，清水漂洗一下后放在定影液中至底片*定影，清水沖凈晾干，標定Marker，進行分析與掃描。2．AP-NBT/B...
4-17
目的：研究楊梅苷對大鼠離體心臟缺血再灌注損傷的保護作用及其機制。方法：60只SD大鼠隨機分為6組:正常對照組、模型組、陽性給藥組(維拉帕米100μg/L)和楊梅苷低中高劑量組(2.5,5,10mg/L),每組10只。釆用Langendorff離體心臟灌流技術,停灌30min,再灌45min,造成心肌缺血再灌注損傷模型。記錄楊梅苷對心臟血流動力學指標的影響,測定冠脈流出液中心肌三酶LDH、CK、AST的水平,心肌組織中抗氧化酶SOD、CAT的活性及脂質過氧化物MDA的含量。HE...
4-17
目的：探討和比較不同干預方案下辛伐他汀對去卵巢大鼠骨丟失和骨質量下降的干預效果。方法：3月齡雌性SD大鼠32只,隨機分為4組,每組8只:假手術(A)組、卵巢切除(B)組、卵巢切除加辛伐他汀前半程干預組(C)和后半程干預組(D)。除A組接受假手術外,其余各組大鼠行雙側卵巢切除術,C組于術后給予辛伐他汀(5mg/kg/d)干預10周后停藥,D組于術后10周開始接受辛伐他汀干預。術后20周處死所有大鼠,采用酶聯免疫吸附測定法(ELISA)檢測血清I型前膠原氨基端前肽(PINP)、I...
4-17
目的：擬研究心室肌細胞外基質能否促進植入心肌梗死心肌組織內的心肌球源性心肌干細胞（CDC）向心肌細胞，血管內皮及血管平滑肌細胞分化，改善大鼠心肌梗死后的心臟結構及功能。方法：心肌組織塊培養法培養CDC，脫細胞法配置ECM，結扎Wistar大鼠前降支建立急性心肌梗死模型。分別向心肌梗死心肌組織內注入IMDM（I組），ECM懸液（E組），含106CDCs的IMDM溶液（IC組），含106CDCs的ECM懸液（EC組），每組心肌梗死大鼠6只。3周后心臟彩超評估心臟功能，Masson...
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