|99精品视频一区二区三区|久久久久久久久一区二区三区|久久国产视频一区二区三区|国产精品毛片av久久

咨詢熱線（微信同號）

18017847121

慢病毒轉染實驗

簡要描述：慢病毒轉染實驗是一種利用改造后的慢病毒載體將外源基因穩定導入宿主細胞的技術。慢病毒屬于逆轉錄病毒，具有感染分裂和非分裂細胞的能力，能將目的基因整合到宿主基因組中，實現長期穩定表達。該技術廣泛應用于基因功能研究、基因治療和誘導多能干細胞（iPS細胞）的制備等領域。

更新時間：2025-07-10
瀏覽次數：108

產品咨詢聯系我們

產品分類

實驗

染色實驗動物實驗分子實驗病理實驗細胞實驗基因測序蛋白實驗動物模型抗體定制實驗科研實驗檢測實驗查看全部產品

詳細介紹

一、技術定義與核心價值

慢病毒轉染是利用改造后的慢病毒載體將外源基因遞送至靶細胞，實現長期穩定表達的基因導入技術。其核心優勢包括：

廣譜細胞適用性：可感染分裂細胞與非分裂細胞（如神經元、干細胞、原代細胞），突破傳統轉染限制。
高效整合表達：病毒RNA經逆轉錄為DNA后整合至宿主基因組，實現外源基因的yong久性表達。
低免疫原性：刪除病毒致病基因（如HIV的 tat、rev），顯著降低宿主免疫反應。
操作便捷性：無需復雜轉染試劑，通過病毒顆粒直接感染細胞。

術語辨析：
轉染（Transfection）：通常指非病毒介導的核酸導入（如電穿孔、脂質體）。
轉導（Transduction）：特指病毒介導的基因傳遞，慢病毒技術屬于此類。

二、分子機制：從病毒包裝到基因整合

（一）慢病毒載體系統構成

組分	功能	技術演進
轉移質粒	攜帶外源基因（如cDNA、shRNA）及包裝信號（Ψ）	第三代載體刪除 tat，改用CMV啟動子驅動轉錄
包裝質粒	表達病毒結構蛋白（Gag、Pol）	分割為gag/pol與rev兩質粒，降低重組風險
包膜蛋白質粒	表達VSV-G蛋白（水皰性口炎病毒G蛋白），決定宿主范圍	替代HIV天然包膜，擴大感染細胞類型
輔助質粒	提供Rev蛋白，促進未剪接RNA出核	增強病毒產量

（二）宿主細胞內的基因遞送流程

病毒進入：VSV-G蛋白結合靶細胞膜受體（如LDLR），介導膜融合。
逆轉錄與入核：病毒RNA在胞質逆轉錄為cDNA，經整合前復合體（PIC）轉運至核內。
基因組整合：病毒整合酶（Integrase）將cDNA隨機插入宿主染色體，實現yong久性表達。

三、標準操作流程與技術優化

（一）病毒包裝與純化（以293T細胞為例）

步驟	操作要點	質控標準
質粒共轉染	四質粒系統（轉移+包裝+包膜+輔助）轉染293T細胞，48-72小時收集上清	質粒純度＞1.8（A260/A280），無內毒素
病毒濃縮	超速離心（50,000×g）或PEG沉淀法，提高滴度10-100倍	濃縮后滴度＞1×10? IFU/mL
滴度測定	流式細胞術（熒光報告基因）或qPCR（病毒基因組拷貝數）	功能性滴度（TU/mL）＞10?為合格

（二）靶細胞轉染與篩選

感染條件優化：

添加聚凝胺（Polybrene，8μg/mL）增強病毒吸附。
感染復數（MOI）測試：通常MOI=5-20（根據細胞類型調整）。

穩定株篩選：

抗生素篩選：嘌呤霉素（1μg/mL）處理7-14天，清除未轉染細胞。
單克隆擴增：有限稀釋法獲得均一性細胞株。

關鍵技巧：
非分裂細胞（如神經元）需延長感染時間至72小時。
原代細胞建議使用低MOI（≤5）避免毒性。

產品咨詢

留言框

產品：
您的單位：
您的姓名：
聯系電話：
常用郵箱：
省份：
詳細地址：
補充說明：
驗證碼：

請輸入計算結果（填寫阿拉伯數字），如：三加四=7

上海達為科生物科技有限公司

聯系人：張
地址：上海市長江南路180號長江軟件園B區B637室
郵箱：2844970554@qq.com
傳真：

快速鏈接

關注我們

歡迎您關注我們的微信公眾號了解更多信息

掃一掃
關注我們

管理登陸技術支持：化工儀器網

|99精品视频一区二区三区|久久久久久久久一区二区三区|久久国产视频一区二区三区|国产精品毛片av久久

慢病毒轉染實驗

一、技術定義與核心價值

二、分子機制：從病毒包裝到基因整合

（一）慢病毒載體系統構成

（二）宿主細胞內的基因遞送流程

三、標準操作流程與技術優化

（一）病毒包裝與純化（以293T細胞為例）

（二）靶細胞轉染與篩選

留言框

產品：

您的單位：

您的姓名：

聯系電話：

常用郵箱：

省份：

詳細地址：

補充說明：

驗證碼：

一、技術定義與核心價值

二、分子機制：從病毒包裝到基因整合

三、標準操作流程與技術優化